-80℃及液氮凍存外周血干細胞的基礎(chǔ)及臨床研究氣相液氮罐

摘要目的：探討非程控降溫-80℃冰箱凍存自體外周血干細胞(APRSC)與程控降溫液lu凍存APBSC對細胞生物學(xué)的影響，井對自體造血干細胞移植的效果進行比較，為非程控降溫-80℃冰箱凍存APBSC在臨床上的推廣應(yīng)用提供依據(jù)。方法：回顧性分析非程控降溫-80℃冰箱凍存APBSC及群控降溫液氮凍存APBSC對ANC、MNC、CD34+細胞以及CFU-GM回收率的影響，并對72例接受自體造血干細胞移植的血液系統(tǒng)惡性腫瘤病人的造血重建的速度進行了比較。結(jié)果：兩種凍存方法的ANC、MNC、CD34+細胞及CFU。GM回收率的影響無顯著差異，移植后造血重建的速度亦無顯著差異。結(jié)論：非程控降溫-80℃冰箱凍存APBSC是一種簡便易行的凍存方法。在國內(nèi)某些單位可以替代程控降溫液氰凍存APRSC進行干細胞移植。自增壓液氮罐

    關(guān)鍵詞自體造血干細胞移植造血干細胞(凍存)惡性腫瘤

    非程控降溫-80℃冰箱凍存自體外周血千細胞(APBSC)因其簡便易行。在國內(nèi)上E在不斷地推廣，我科自1988年開展程控降溫液氨凍存APBSC進行干細胞移植及非程控降溫-80℃冰箱凍存自體外周血干細胞移植以來，共完成了72例。現(xiàn)將兩種凍存自體外周血干細胞移植結(jié)果總結(jié)如下。但禹內(nèi)尚缺乏對二者的系統(tǒng)比較研究。我們試圖通過系統(tǒng)比較二者的區(qū)別。觀察非程控降溫-80℃冰箱凍存APBSC進行干細胞移植的有效性和可行性。

    病例和方法

    1.1病例液氮涼存組36例，男性19例，女性L7例。平均年齡26。2(4—47)歲。急性髓細胞白血病(AWL)兒例，急性淋巴細胞白血病(ALL)12例。非霍奇金淋巴瘤(NHL)6例，骨髓增生異常綜合征(iWI)S)RAEBT3例，霍奇金淋巴瘤(1-11))l倒，粒淋混合急性白血病2例，多發(fā)性骨髓瘤(刪)l例。-80℃冰箱凍存組36例，男23例。女13例，平均年齡25。4(5—50)歲。急性髓細胞白血稍(A虬)7倒，急性淋巴細胞白血稿(從L)13例。非霍奇金淋巴瘤(NltL)11例。骨髓增生異常綜臺征(MDS)RAEBTl例。霍奇金淋巴瘤(1iD)2例。粒淋混合急性自血病l例。乳腺癌l例，神經(jīng)母細胞瘤l例。

    1.2APBSC動員[21全部病例均采用化療+刺激因子進行動員。方法為強化化療后9。*+WBC確已F降至低值(一般在2。0X10’，L以F)，并開始有回升的趨勢，同時PLT不低于20X109幾時，使用造血刺激園子，利罱為150p∥12b。皮F注射。至采集結(jié)求。動員天數(shù)，液氮凍存組，平均5犬(4—7犬)：一80℃冰箱凍存組，平均4。5天(3-6天)。自增壓液氮罐

    1.3APBSC采集當w13c恢復(fù)至4.0—10。0X109／L時開始采集，液氮凍存組均用Bxter公司的CS一3000型血細胞分離機進行分離采集；-80℃冰箱凍存組均用COBE公司的Spectra型血細胞分離機進行分離采集。通過股靜脈插管(12F般腔Arrow公司)或通過救臂外周靜脈建立外周通道。每次循環(huán)血量中位數(shù)為8000ml(5000—13000m1)。采集時分血流速平均50m1／分。兩組采集的有核細胞數(shù)(Nc)、單個核細胞數(shù)(M№)、CD。CFU。GM的數(shù)量見表。。臺盼藍拒染率均為100％。

    I.4APBSC凍存兩組采集的APBSC懸液，平均每次約60m1。加少許肝素。計算單個核細胞(眥)數(shù)，加入R蹦r1640保養(yǎng)液，按l：1比例與冷凍保護液均勻混合。-80℃冰箱凍存組使保護液終濃度為5％二甲基強砜(刪S0)，6％羥乙基淀粉(HES)，螂白蛋白(ALB)，llNC含量為2—5x108／ml。將所得混合液裝于冷凍袋中。直接置于-80X]冰箱中凍存。液lu組保護液終濃度為5％1圳S0，經(jīng)卜3℃／分程控降溫至-80℃后置-196℃液氮中保存。凍存大數(shù)，液氮凍存組，中付數(shù)22.5(13—50)天。-80℃冰箱凍存組，中位數(shù)23(15-44)天。

    1.5預(yù)處理方案兩組病人的預(yù)處理方案相似，即AML、ALL、MDS及NHL均用CAT或CET.C：CTX60mg／kg／d×2天，A：Ara—c卜39／d×l天.E：vPl6300-1000mg／d×l天，中位劑量600mg／d.TBI總量低6Gy，高8.5(毗分兩天，劑量率<5.0rad／min。預(yù)處理結(jié)束后24小時回輸APBSC。

    l.6APBSC的解凍：將凍存袋自-80℃冰箱中或液氮中取出后立即放入40℃水浴箱中訊速解凍，不過濾，經(jīng)中心靜脈插管訊速回輸。自增壓液氮罐